ゲル撮影装置 25塩基単鎖DNAを1ピコモルまで計測しました

公開許可を頂いたので、過日、ゲル撮影装置　ＧＥＬＳＣＡＮで撮影したDNAの画像をアップします。
44塩基のDNAでは、0.3ピコモルまで検知できています。

■実験１：FITC修飾DNAの検出限界調査

スキャン条件：
電気泳動ゲル専用蛍光イメージスキャナ　GELSCAN
解像度：300ppi (pixel per inch, 85μm）
イメージタイプ：16bitグレースケール

対象：
44塩基単鎖DNA
25塩基単鎖DNA
濃度：10, 6, 3, 1, 0.6, 0.3 [pmol]
3'末端FITC修飾

（染色しているのではなく、DNAの合成段階で化学的にDNAにFITCを結合。）

■実験２：蛍光試薬FITCでの検量線作成

目的：検量線の作成
方法：
・『3'末端FITC修飾した』濃度の異なるDNAを電気泳動。
・GELSCANのDensitometorモードにて、16bit画像を得る。
　（GELSCANはフルカラーRGBにて48bit画像を得られる）
・NIHのImageJにて定量化し、検量線を作成する。
DNA濃度　100, 60, 30, 10 pmol
　（10μmol/Lを　それぞれ、10, 6, 3, 1μL）
DNA塩基数　25塩基、44塩基の２種。
蛍光試薬：FITC

3'末端FITC修飾

（染色しているのではなく、DNAの合成段階で化学的にDNAにFITCを結合。）

※44塩基の60pmolのプロットが少し直線から外れている理由は、ゲルが裂けてしまっていることが原因していると思われる。

FITCの励起波長、蛍光波長：

Invitrogen - Molecular Probes - Spectra Viewer

より。

■　FITC

同仁化学研究所　WebSiteより。